双组份TMB ELISA 底物 HS（TMBH）

Q1：双组份 TMB 底物由什么组成？显色原理是什么？A：双组份 TMB 底物分为两瓶独立储存的液体：底物液A与显色液B。使用时将两液等比例混合，得到同时含 TMB 与 H₂O₂ 的工作液，再加到已结合 HRP 标记物的孔中。显色原理与单组份一致：HRP 催化 H₂O₂ 氧化 TMB，先产生深蓝色产物（吸收峰约 370nm 和 652nm），加酸终止后转为黄色二亚胺产物（吸收峰 450nm），用酶标仪读数。

Q2：双组份 TMB 使用前如何配制？混合比例是多少？A：常规按 1:1（底物液A : 底物液B）等体积混合，配制量以当次实验用量为准，现配现用。混合时建议将两液分别平衡至室温后等量加入洁净容器，轻轻混匀，避免剧烈产生气泡。

Q3：配制后的工作液可以保存多久？A：双组份混合后形成的 TMB 工作液稳定性有限，通常需在配制当天用完，放置过久会出现本底升高、信号下降。因此建议按实际板数估算用量、随用随配，不要提前大量配制或隔天使用。

Q4：双组份 TMB 的保存条件与保质期？A：两瓶试剂未混合前应 2–8°C 避光储存，避免冷冻（冻融可能破坏底物液的溶解状态与显色性能）。分储状态下底物液与显色液各自稳定，未开封保质期较长。使用前平衡至室温，混合后按 Q3 当次用完。

Q5：双组份和单组份 TMB 怎么选？A：单组份是即用型，开盖平衡即可加样，批间差小、操作省事，适合常规生产和高通量场景；双组份需现配，但分储状态下未混合试剂更稳定、运输与库存更灵活，且可通过微调混合比例调节显色节奏与信号强度，适合对配方有定制需求或用量波动大的场景。追求便利与一致性推荐选择单组份（如 Durastab™ TMHS / TMST 等系列）。

Q6：显色后如何终止反应？A：同单组份，使用硫酸或盐酸类终止液终止，颜色由蓝转黄。Durastab™ TMB 终止液 450（对应 450nm 读值）与终止液 650（对应 650nm 读值）均适用，终止后无沉淀、2 小时内信号稳定，便于批量读板。

Q7：开瓶后如何取用与保存？A：两瓶分别取用后及时盖紧、2–8°C 避光冷藏，避免瓶口污染与反复冻融。底物液取用建议使用洁净干燥器具，减少水分带入；显色液避免与金属离子接触。正常取用节奏下未混合试剂可长期稳定，但混合后工作液须按 Q3 当次用完。

Q8：显色不均或局部偏色怎么办？A：双组份显色不均常见于混合不匀、加样量偏差或孔间工作液停留时间不一致。建议：配制时充分但温和混匀；保证每孔加样体积一致；加完工作液后轻晃板使液膜均匀；统一终止时间。若为整板背景偏高，可参照单组份 FAQ 中的背景排查思路（控制显色时间、保证洗板、避免底物污染）。